对虾病害检测中，为什么会用内标（IPC）？
2023-11-10
1、什么是内标？
内标：内部检测标准，内标基因也称管家基因、内参基因、阳性内参（Internal Positive Control，IPC）等，通常选择在生物体各类细胞都能表达的基因，通过内标的设置，来监控提取和扩增过程，防止假阴性。
2、“内源性内标”和“外源性内标”区别
内源性内标 | 外源性内标 | |
试剂系列 | V3.0/V3.1 | V3.3/V3.4 |
概念 | 采用虾固有的看家基因，其表达水平受环境因素影响较小，在个体各个生长阶段的几乎全部组织中持续表达变化小。 | 外加到提取溶液中的，人工设计合成的与模板扩增效率相似的一段基因片段。 |
优点 | ①既可以监测是否采集到足量细胞，又可以检测提取和扩增检测过程； ②仅适用对虾来源样品。 | ①与目标基因序列存在形式相似，更好的反映因抑制物或提取效率不足而产生的“假阴性”。检测核酸提取及扩增检测过程； ②对饲料、水样等非虾源样本同样有效。 |
3、常见异常内标曲线及原因分析
【1】外源性内标
⑴目标基因和内标均无扩增
可能原因：
多数为内标样本错加漏加、核酸加样时错加漏加；若连续多个样本存在此情况，考虑提取试剂、仪器的问题。
常见原因：
应先明确目标基因是否同内标基因存在竞争或抑制作用，若不存在，可能为内标样本错加漏加。下图为典型高浓度样本抑制内标基因扩增。
常见原因：采样失败或试剂失效。
内标的设置一开始就是为了避免“假阴性”的出现，监控整个反应过程是否顺利进行，无论是内源性还是外源性的内标都可以满足这个需求。此外，华峰生物也有不含内标的虾病害检测试剂，小主们可根据检测的不同样品、成本预算、实际情况等选择所需。
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